一、使用前准备

　　充分活化：

　　反相柱（如C18）先用甲醇或乙腈冲洗5–10柱体积，再转至水相；

　　离子交换柱用高盐缓冲液平衡；

　　避免干柱上样，防止气泡滞留破坏流路均匀性；

　　溶剂互溶过渡：样品溶剂与初始流动相需互溶，否则易析出沉淀堵塞柱头。

　　二、上样与洗脱

　　上样量适中：不超过柱载量（通常≤5%柱体积），过载会导致峰拖尾或穿透；

　　流速合理匹配：

　　分析柱：0.5–2mL/min；

　　制备柱：按线速度（cm/h）计算，避免过高流速降低分离效率；

　　梯度洗脱优化：缓慢改变洗脱强度，提升分辨率，尤其对复杂混合物。

　　三、柱后处理

　　清洗：

　　反相柱：先用水/有机相（如95:5）冲洗盐分，再用高比例有机相（如90%甲醇）保存；

　　蛋白纯化柱：用0.5MNaOH或20%乙醇消毒，去除内毒素与微生物；

　　正确保存：

　　反相柱存于甲醇/乙腈中；

　　亲水柱（如HILIC）可存于乙腈/水（90:10）；

　　禁止将含缓冲盐的柱子直接放入纯有机相，防止盐析结晶堵塞。

　　四、压力与温度监控

　　背压异常预警：压力突升可能因筛板堵塞，需反冲或更换入口滤片；

　　控温使用：高温可提升传质效率，但超过柱温限（通常60℃）会加速键合相水解。

　　五、再生与寿命管理

　　定期再生：

　　C18柱可用强溶剂（如异丙醇）冲洗强保留杂质；

　　离子交换柱用NaCl梯度洗脱残留蛋白；

　　记录使用次数：建立《纯化柱日志》，标注样品类型、压力变化、理论塔板数，预判更换周期。

　　六、安全与禁忌提醒